一、BCA（双氮苯酚胺酸）法简介

BCA（双氮苯酚胺酸）法是一种常用的生物医疗蛋白质定量检测技术。这种方法的原理在于，蛋白质与铜离子在碱性环境中发生络合反应，形成稳定的紫红色复合物。通过与标准曲线进行比较，我们可以精确计算出待测蛋白的浓度。该检测方法具有灵敏度高、准确性强、操作简便和抗干扰能力强等优点，广泛应用于生命科学及生物医学等研究领域。

二、实验步骤

1. 试剂准备

(1) BCA工作液：将BCA试剂A和B按50:1的比例混合，充分摇匀备用。 (2) 标准蛋白溶液：取适量的标准蛋白，使用PBS或去离子水溶解，制备成浓度为1mg/mL的标准蛋白溶液。

2. 蛋白样品制备

(1) 细胞裂解：将细胞样品离心，去除上清液，添加适量的细胞裂解液，在冰上裂解30分钟，以确保细胞充分裂解。 (2) 去除杂质：对裂解后的样品进行离心，去掉沉淀，保留上清液。向上清液中添加适量的SDS，使最终浓度达到0.1%，并充分混合。 (3) 标准曲线制备：取适量的标准蛋白溶液，加入适量的SDS，使终浓度为0.1%，然后稀释成不同浓度的标准蛋白溶液。取96孔板，分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，每个浓度设三个复孔。在每个孔中加入BCA工作液，充分混合。随后，按照说明书要求在特定波长下测量吸光度值，以绘制标准曲线。

3. 蛋白定量检测

(1) 取适量的待测蛋白样品，添加适量的SDS，使其最终浓度为0.1%，并充分混合。按照标准曲线的制备方法，加入BCA工作液，测量吸光度值。 (2) 根据标准曲线查找待测蛋白样品的浓度。如果样品浓度过高，可以进行适当稀释后再进行测定。

三、注意事项

1. BCA工作液应储存于4℃，并避免光照保存，避免反复冻融带来的影响。 2. 在实验过程中请保持样品及标准蛋白溶液的pH值一致，以确保检测结果的准确性。 3. 务必避免交叉污染，以免影响实验结果的可靠性。 4. 对于某些特定类型的蛋白质样品，可能需要采用其他检测方法以进行定量分析。 尊龙凯时(中国区)人生就是搏，致力于为生物医疗领域提供优质的解决方案和技术支持，助力科研与临床进步。